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簡(jiǎn)要描述:梅里埃20100 腸桿菌鑒定試劑盒API20E貨號:20100 貨品名稱(chēng):腸桿菌和其它非苛養革蘭氏陰性桿菌鑒定試劑盒(比色法) 規格:25條/盒用途:該產(chǎn)品用于腸桿菌和其它非苛養革蘭氏陰性桿菌的鑒定。該產(chǎn)品用于可導致腹瀉、血流感染、尿路感染等的腸桿菌和其它非苛養革蘭氏陰性桿菌的鑒定,臨床常見(jiàn)樣本來(lái)源有糞便、直腸拭子、尿、血等。說(shuō)明書(shū)在附錄可自行下載領(lǐng)取
REF 20 100 / 20 160 07584E - CN - 2004/05
® 20 E
腸桿菌和其它革蘭氏陰性桿菌鑒定系統
概要說(shuō)明
API 20 E 是腸桿菌科和其它非苛養 G-桿菌的標準鑒定系
統 包括 21 個(gè)標準化微型生化測試和鑒定資料庫 可鑒定
的菌譜名錄 請參考說(shuō)明書(shū)后的鑒定表
原理
API 20 E 試驗條是由 20 個(gè)含干燥底物的小管所組成 這些
測定管用細菌懸浮液接種 培養一定時(shí)間後 通過(guò)代謝作
用產(chǎn)生顏色的變化 或是加入試劑後變色而觀(guān)察其結果
根據說(shuō)明表判讀反應 參照分析圖索引或使用鑒定軟件得
到鑒定結果
試劑盒內容物
25 測試試劑盒 ( 貨號. 20 100)
- 25 API 20 E 試條
- 25 培養盒
- 25 結果報告單
- 1 個(gè)封口夾
- 1 份產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)
100 測試試劑盒 ( 貨號. 20 160)
- 100 API 20 E 試條 (4x25 試條)
- 100 培養盒
- 100 結果報告單
- 1 個(gè)封口夾
- 1 份產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)
試條的成分
API 20 E 試條的成分請參閱說(shuō)明書(shū)后的結果判讀表
必需但未提供的試劑和材料
試劑
- 0.85 % API NaCl 培養基 5 ml (Ref. 20 230) or
API 懸浮培養基 5 ml (Ref. 20 150)
- API 20 E 附加試劑盒 (Ref. 20 120) 或
單個(gè)的附加試劑 TDA (Ref. 70 402)
JAMES (Ref. 70 542)
VP 1 + VP 2 (Ref. 70 422)
NIT 1 + NIT 2 (Ref. 70 442)
- Zn 試劑 (Ref. 70 380)
- 氧化酶 (Ref. 55 635*)
* 目錄中沒(méi)有銷(xiāo)售的國家 請使用相近的試劑
- 礦物油 (Ref. 70 100)
- API 20 E 數值分析圖譜(Ref. 20 190) 或
鑒定軟件
材料
- 吸管或 PSI 管
- 安瓿開(kāi)啟器
- 安瓿架
- 微生物實(shí)驗室一般設備
可能需要的附加試劑
- API OF 培養基 (Ref. 50 110) :
用于測定發(fā)酵型或氧化型代謝作用
- API M 培養基 (Ref. 50 120) :
用于測定兼性厭氧菌的運動(dòng)性
警告和注意
• 僅供體外診斷和微生物質(zhì)控使用
• 僅供專(zhuān)業(yè)人員使用
• 此試劑盒中含有動(dòng)物源性成分 已知所使用原始材料和動(dòng)
物的衛生狀況不能*保證其不含傳染性的物質(zhì) 因此我
們建議所有樣品應被視為具有傳染性 并應按通常的安全
措施對其進(jìn)行正確處理 勿吸入或咽下
• 所有標本 細菌培養物 接種物應被視為 具有傳染性并
應進(jìn)行正確處理 在整個(gè)試驗過(guò)程中 要遵守無(wú)菌技術(shù)要
求和通常使用的防范措施 可參照 NCCLS M29-A 保
護試驗室工作人員免受儀器生物公害和通過(guò)血液 體液
組織傳染的疾病的侵害-當前版本 的內容 另外的防護
措施 可參照 微生物和生物醫學(xué)實(shí)驗室的生物研究安全
-CDC/NIH – 新版本 或參照各國正在使用的規章執
行
• 不要使用過(guò)期的試劑
• 使用前 請檢查包裝和成分是否完整
• 不要使用已經(jīng)破損的試條 杯子破壞 干燥劑小袋已打開(kāi)
等
• 有關(guān)產(chǎn)品性能的數據均由嚴格按照作步驟所進(jìn)行的試驗得
出 任何操作步驟的改變或偏離均會(huì )影響試驗結果
• 試驗結果的判斷應由合格的微生物家所作 同時(shí)應將病
史 標本來(lái)源 菌落和顯微形態(tài)考慮在內 如有可能 再
作一些附加試驗 尤其是抗生素敏感譜
儲存條件
試驗條采用鋁袋包裝并附有干燥劑
一旦打開(kāi)鋁袋(*) 請使用封口夾(試劑盒已含有)重新封口
以保證試條的干燥 把鋁袋撕開(kāi)處末端放入打開(kāi)的夾子并
小心的加緊兩端 開(kāi)啟鋁袋后 在 2-8 環(huán)境下 試驗條可
享有 10 個(gè)月的有效期(或包裝盒上的有效期 以較短時(shí)間
為準)
(*) 建議開(kāi)封的方法 在封口下方剪開(kāi)鋁箔裝 為防止意外
損壞干燥劑 開(kāi)封時(shí)應保持鋁箔袋垂直
標本 采集和前處理
API 20 E 不能直接用于臨床或其他標本
需要進(jìn)行鑒定的微生物必須首先根據標準微生物處理技術(shù)
于適合腸桿菌和/或非苛養革蘭氏陰性桿菌的培養瓊脂 例
如 麥康凱 上培養分離
IVD
PDF 文件使用 "pdfFactory" 試用版本創(chuàng )建
api ® 20 E 07584E – CN - 2004/05
bioMérieux ® SA 中文 - 2
使用說(shuō)明
氧化酶試驗
必須按照制造商的使用說(shuō)明進(jìn)行氧化酶試驗 由于它是
終圖譜的主要數據 請將其記錄于結果報告單上 第二十
一個(gè)試驗
試條的準備
• 準備一個(gè)培養盒 盤(pán)和蓋子 倒入約 5ml 蒸餾水或軟化
水[或其它不含雜質(zhì)或產(chǎn)生揮發(fā)性氣體的化學(xué)物質(zhì) 如
Cl2, CO2,等 ]于盤(pán)的蜂窩小凹中 造成一個(gè)濕室
• 在盤(pán)的沿邊寫(xiě)上菌株號(不要寫(xiě)在蓋上 以免錯放)
• 從包裝中取出試驗條放到盤(pán)中
• 將試條置于孵育箱內
注意 API 20 E 只能用于腸道細菌和或非苛養的 G- 桿菌
苛養菌主要指對營(yíng)養需求有特殊需要的菌(例 布魯氏菌屬
Brucella 和 法朗西絲菌屬 Francisella) 這些菌沒(méi)有包括在
API 20 E 數據庫中 必須采用有效方法 排除這些菌的存
在
接種物的準備
• 根據"警告及注意"一欄所列方法打開(kāi)一安瓿 API 0.85%
NaCl 培養基 (5ml)或一安瓿 API 懸浮培養基(5 ml) 或
使用 5ml 0.85 %無(wú)雜質(zhì) 無(wú)菌鹽水
• 用吸管或接種針從分離物的平板上挑取單個(gè)分純菌落至懸
浮基物中 建議使用新鮮培養 18-24 小時(shí)
• 仔細研勻以達到均一的細菌懸液
制備好的菌懸液必須立即使用
注意 大多數弧菌 Vibrio 均嗜鹽 如懷疑菌株為弧菌
請使用 0.85% NaCl (5ml) 培養基
試條的接種
• 用同一根吸管 將菌懸液充滿(mǎn) CIT VP 和 GEL 管
的管部和杯部
• 其它管僅充滿(mǎn)管部(不是杯部)
• ADH, LDC, ODC, H 2 S 和 URE 管 用礦物油覆蓋 以形
成厭氧環(huán)境
• 蓋上培養盒
• 于 36°C ± 2°C 孵育 18-24 小時(shí)
判讀和解釋
試條的判讀
• 孵育后 根據使用手冊中的讀數表判讀各反應結果
• 如果 3 個(gè)或 3 個(gè)以上測定 GLU 試驗+或- 為陽(yáng)性結果
記錄所有自發(fā)反應于結果報告單上并觀(guān)察需要附加試劑的
試驗的結果
- TDA 試驗 加 1 滴 TDA 試劑 深褐色為 陽(yáng)性反應 記
錄于報告單上
- IND 試驗 加 1 滴 JAMES 試劑 反應立即發(fā)生 粉紅
色出現在整個(gè)反應應管者為 陽(yáng)性 記錄于報告單上
- VP 試驗 加 1 滴 VP 1 和 1 滴 VP 2 試劑 至少等待
10 分鐘 淺粉或 紅色表明為 陽(yáng)性結果 記錄于報告單
上 如 淺粉紅色在 10 至 12 分鐘內出現 判斷結果為 陰
性
注意 吲哚產(chǎn)生試驗必須后進(jìn)行 因為該反應釋放的氣
體產(chǎn)物會(huì )干擾試條的其他試驗 在加入附加試劑后 請小
心勿調換培養盒蓋
• 如果加入附加試劑前陽(yáng)性結果 包括 GLU 試驗 的數量
少于 3 個(gè)
- 重新培養 24 小時(shí) ± 2小時(shí) 且不要加任何試劑
- 重新進(jìn)行需要加入附加試劑的測試 如前說(shuō)明
- 為了完成鑒定 可能需要進(jìn)行補充試驗 參考有關(guān)鑒定
的段落
解釋
鑒定結果從 數字索引中獲得
• 所得的反應結果編為數字圖譜
所得反應的類(lèi)型必須以數字化形式記錄在報告單 每 3 個(gè)
測定為一組 每個(gè)以 1 2 和 4 標明 在每組中 陽(yáng)性反
應以相應的數字相加 由 API 20 NE 的 20 個(gè)測定可得一
個(gè) 7 位數 氧化酶反應構其第 21 個(gè)反應 如陽(yáng)性則為
4
• 鑒定
使用數據庫 (V4.0)進(jìn)行鑒定
* 根據數字圖譜
- 從使用手冊的讀數表中尋找數字圖譜
* 使用鑒定軟件
- 在鍵盤(pán)上輸入 7 位阿拉伯數字的圖譜
在某些情況下 7 位數檢索編碼還不能區分細菌 必須進(jìn)行
以下一些補充試驗
- 硝酸鹽還原到亞硝酸鹽(NO2)和氮氣(N2) 各加一滴 Nit
1 和 Nit 2 試劑于葡萄糖 GLU 管內 待 2~3 分鐘后 紅
色表示 陽(yáng)性結果(NO2) 陰性反應 黃色 可能由于還原
至 N2 有時(shí)還有氣泡 加 2-3mg 鋅粉到葡萄糖 GLU
管 5 分鐘后 如果管保持 黃色表示 陽(yáng)性結果(N2) 記錄
于報告單 如果測定變 粉紅 這明是 陰性反應 硝酸鹽仍
留管內 被鋅粉還原 該反應用于檢測革蘭陰性 氧化酶
陽(yáng)性的桿菌
注意 出于和吲哚試驗同樣的原因 參考 試條的判讀
中的注意項 硝酸鹽還原試驗必須后進(jìn)行
- 動(dòng)力 (MOB) 接種一安瓿 API M 培養基 參見(jiàn)產(chǎn)品說(shuō)明
書(shū)
- 麥康凱 MacConkey 培養基生長(cháng)實(shí)驗(McC) 接種一個(gè)
麥康凱 MacConkey 平板 參見(jiàn)產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)
- 葡萄糖氧化 (OF-O) 接種一安瓿 API OF 培養基 參見(jiàn)
產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)
- 葡萄糖發(fā)酵 (OF-F) 接種一安瓿 API OF 培養基 參見(jiàn)
產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)
這些在數值編碼本開(kāi)始部分有所介紹的補充試驗 可以組
成 9 位數的數值索引 從而可以用鑒定軟件獲得鑒定結
果
5 315 173 (57) Enterobacter gergoviae
如果分辨率很低 提議進(jìn)行進(jìn)一步的試驗 請參考鑒定軟
件或數值分析索引
PDF 文件使用 "pdfFactory" 試用版本創(chuàng )建
質(zhì) 量 控 制
培養基 試驗條和試劑在有效期內不同階段需作系統的質(zhì)量控制 對進(jìn)行質(zhì)控實(shí)驗室 推薦標準菌株 1. 大腸埃希菌
Escherichia coli ATCC ® 25922 或以下菌株之一
2. 嗜麥芽糖寡養單胞菌 Stenotrophomonas maltophilia
ATCC 51331
3. 陰溝腸桿菌 Enterobacter cloacae
ATCC 13047
4. 奇異變形桿菌 Proteus mirabilis
ATCC 35659
5. 肺炎克雷伯菌肺炎亞種 Klebsiella pneumoniae ssp
pneumoniae ATCC 35657
ATCC : American Type Culture Collection, 10801 University Boulevard, Manassas, VA 20110-2209, USA.
ONPG ADH LDC ODC CIT H 2 S URE TDA IND VP GEL GLU MAN INO SOR RHA SAC MEL AMY ARA NO 2 N 2 *
1. + – + + – – – – + – – + + – + + – + – + + –
2. + – V – V – – – – – + – – – – – – – – – – –
3. + + – + + – – – – + – + + – + + + + + + + –
4. – – – + V + + + – – V + – – – – V – – – + –
5. + – + – + – V – – V – + + + + + + + + + + –
* ATCC 13047 和 ATCC 25922 菌株可能會(huì )觀(guān)察到 N 2 (+)結果
• ATCC 51331 菌株于胰酶大豆血瓊脂上孵育 24-48 小時(shí) 可以獲得反應圖譜
• 其他的菌株于胰酶大豆血瓊脂上孵育 18-24 小時(shí) 可以獲得反應圖譜
• 請使用 API NaCl 0.85 % 培養基制備菌懸液
根據當地相應的規定進(jìn)行質(zhì)量控制是使用者的責任
方法 的 局限 性
• API 20 E 鑒定系統能準確鑒定在鑒定范圍 請查閱該說(shuō)
明書(shū)后的鑒定表 內的腸道細菌和非苛養 革蘭氏陰性桿
菌菌種 但不能用于鑒定/排除鑒定范圍外的微生物
• 由于在反應原理上 API 技術(shù)與傳統技術(shù)間存在差異 有可
能出現與常規方法不同的生化反應結果 同時(shí)由于所用底
物的差異亦造成陽(yáng)性反應百分比的不同
• 在某些非常罕見(jiàn)的情況下 某些微生物如克雷伯菌屬
Klebsiella 或變形菌屬 Proteus 與葡萄糖的反應可
能會(huì )由陽(yáng)性轉變?yōu)殛幮?例如可以觀(guān)察到藍綠色變化 這
個(gè)反應將記錄為陰性反應 這種情況已經(jīng)被反映到鑒定表
中的鑒定百分率上
• 如 果 鑒 定 為 沙 門(mén) 菌 Salmonella 或 志 賀 菌
Shigella 請進(jìn)行血清學(xué)鑒定以確認鑒定結果
• 分離自膽囊纖維化病人的非發(fā)酵革蘭陰性桿菌可能會(huì )產(chǎn)生
不典型的生化圖譜 影響鑒定的結果
• 必須使用單個(gè)微生物的純培養
預 期 值范圍
參閱在本說(shuō)明書(shū)尾部的 反應鑒定表 以取得有關(guān)各種生
化反應陽(yáng)性率的資料
性能
• 腸桿菌
對共 5514 株 本產(chǎn)品鑒定范圍內的 不同來(lái)源的臨床及
收藏菌株鑒定結果顯示
- 92.80 % 的菌株可被準確鑒定 需要或不需附加檢測
- 4.61 % 的菌株無(wú)法鑒定
- 2.59 % 的菌株被錯誤鑒定
• 其它非苛養革蘭陰性桿菌
對共 2386 株 本產(chǎn)品鑒定范圍內的 不同來(lái)源的臨床及
收藏菌株鑒定結果顯示
- 90.32 % 的菌株可被準確鑒定 需要或不需附加檢測
- 6.16 % 的菌株無(wú)法鑒定
- 3.52 % 的菌株被錯誤鑒定
廢 物處理
所有使用或未使用的試劑和其他污染性材料應遵循傳染性
或潛在傳染性產(chǎn)品的處理程序
每個(gè)實(shí)驗室都有責任根據其實(shí)驗的類(lèi)型和危險性級別進(jìn)行
廢物和污物的處理 同時(shí)要嚴格依照有關(guān)的規定對待和處
理所有的廢物和污物
擔保
生物梅里埃 bioMérieux 拒絕任何形式的擔保 明確的或暗
指的 包括任何暗含的商業(yè)性和具有特殊用途適用性的擔
保 生物梅里埃 bioMérieux 將不對任何偶然的和相因而生
的損害承擔義務(wù) 生物梅里埃也不會(huì )對任何使用者提出的
超過(guò)其用于支付購買(mǎi)生物梅里埃產(chǎn)品或服務(wù)的償還要求承
擔義務(wù)
結 果 判 讀 表
結果
試驗 有效成分
量
(mg/cup.)
反應/ 酶
陰性 陽(yáng)性
ONPG
鄰硝基苯-半乳糖苷
0.223
β-半乳糖苷酶 無(wú)色 黃色(1)
ADH 精氨酸 1.9 精氨酸雙水介酶 黃色 紅/橙色(2)
LDC 賴(lài)氨酸 1.9 賴(lài)氨酸脫羧酶 黃色 橙色(2)
ODC 鳥(niǎo)氨酸 1.9 鳥(niǎo)氨酶脫羧 黃色 紅/橙色(2)
CIT 檸檬酸鈉
0.756
檸檬酸利用 淡綠/黃 蘭綠/蘭(3)
H2S 硫代硫酸鈉 0.075 H2S 產(chǎn)生 無(wú)色/微灰 黑色沉淀/細線(xiàn)
URE 脲素 0.76 脲酶 黃色 紅/橙色(2)
TDA /立即
TDA 色氨酸
0.38
色氨酸脫氨酶
黃色 深褐
JAMES / 立即
IND 色氨酸
0.19
吲哚產(chǎn)生
無(wú)色/淺綠/黃色
粉紅
VP 1 + VP 2 / 10 分鐘
VP 丙酮酸鹽 1.9
3-羥基丁酮產(chǎn)生乙酰甲基甲
醇
無(wú)色 粉紅/紅色 (5)
GEL
Kohn 明膠 0.6 明膠酶 黑色素不擴散 黑色素擴散
GLU
葡萄糖
1.9 發(fā)酵/氧化(4)
蘭/蘭綠 黃色
MAN
甘露醇
1.9 發(fā)酵/氧化(4)
蘭/蘭綠 黃色
INO
肌醇
1.9 發(fā)酵/氧化(4)
蘭/蘭綠 黃色
SOR
山梨醇
1.9 發(fā)酵/氧化(4)
蘭/蘭綠 黃色
RHA
鼠李糖
1.9 發(fā)酵/氧化(4)
蘭/蘭綠 黃色
SAC
蔗糖
1.9 發(fā)酵/氧化(4)
蘭/蘭綠 黃色
MEL
密二糖
1.9 發(fā)酵/氧化(4)
蘭/蘭綠 黃色
AMY
苦杏仁苷
0.57 發(fā)酵/氧化(4)
蘭/蘭綠 黃色
ARA
阿拉伯糖
1.9 發(fā)酵/氧化(4)
蘭/蘭綠 黃色
OX (看氧化酶試驗說(shuō)明書(shū)) 細胞色素氧化酶 (看氧化酶試驗說(shuō)明書(shū))
(1) 出現淺黃色應判斷為陽(yáng)性結果
(2) 孵育 36-48 小時(shí)后 出現橙色應判斷為陰性結果
(3) 讀小杯頂部的結果 需氧
(4) 發(fā)酵始于小管的底部 氧化開(kāi)始于杯部
(5) 10 分鐘后出現的淺粉紅色應判斷為陰性結果
• 標示的量可能因使用原料的濃度不同而有所調整
• 某些杯含有動(dòng)物源性產(chǎn)品 特別是蛋白胨
梅里埃20100 腸桿菌鑒定試劑盒API20E
梅里埃20100 腸桿菌鑒定試劑盒API20E